AHCC e sua eficácia contra o HPV

Um novo tratamento é o AHCC® Papiloxyl. O Papilomavírus Humano (HPV) destaca-se como a infecção sexualmente transmissível mais prevalente, distinguindo-se de vírus como o HIV e o HSV (herpes). A sua elevada incidência reflecte-se em quase todos os homens e mulheres sexualmente activos, que eventualmente a contraem em algum momento das suas vidas.

A maioria das pessoas infectadas pelo HPV, sejam homens ou mulheres , não apresentam sintomas e a infecção tende a desaparecer sozinha. Porém, nos casos em que a infecção persiste, pode levar ao aparecimento de verrugas/condilomas genitais ou, em situações mais graves, a certos tipos de cancro.

O HPV é transmitido principalmente através do contato direto pele a pele durante sexo oral, vaginal ou anal desprotegido com uma pessoa infectada. Não é transmitido através de fluidos corporais, como sangue ou sêmen.

É importante ressaltar que, embora na maioria das vezes a infecção pelo HPV não apresente sintomas perceptíveis, a pessoa ainda pode ser portadora e transmiti-la a outras pessoas. O risco de contrair a infecção aumenta em situações como início precoce das relações sexuais, ter múltiplos parceiros sexuais ou não usar preservativo de forma consistente.

Nos homens, o HPV pode causar lesões pré-malignas e cancro do pénis, e nos homens homossexuais também tem sido associado ao desenvolvimento de cancro anal. Além disso, podem aparecer verrugas genitais, como nas mulheres.

O tratamento do HPV se concentra em estimular o sistema imunológico para que ele possa combater a infecção. As lesões causadas pelo vírus podem ser tratadas através de procedimentos como conização do colo do útero ou intervenções cirúrgicas em casos de câncer de colo de útero, vaginal ou vulvar. Um novo tratamento é o AHCC® Papiloxyl .

Os princípios ativos do AHCC são ingredientes encontrados em vários tipos de cogumelos e alguns são derivados de alfa e beta-glucanos, polissacarídeos conhecidos por sua ação benéfica no sistema imunológico. Estes produzem um efeito modulador do sistema imunitário, aumentando a concentração de linfócitos T e B, estimulando a atividade dos macrófagos, fortalecendo assim as defesas do organismo contra a ação de vírus, bactérias, parasitas ou células neoplásicas.

O Composto Ativo Correlacionado à Hexose (AHCC) tem sido objeto de mais de 200 estudos clínicos conduzidos principalmente no Japão. Atualmente, a pesquisa está em andamento em mais de 150 centros de pesquisa e hospitais universitários no Japão e nos Estados Unidos. Todos os anos, desde 1994, mais de 300 médicos e investigadores reúnem-se em Sapporo, no Japão, para o Simpósio da Associação de Investigação AHCC.

A possibilidade de adquirir novamente o HPV está presente, principalmente em situações de depressão do sistema imunológico. A imunidade adquirida após a primeira infecção não é permanente e pode ser afetada em diversas ocasiões. Além disso, é possível contrair outros tipos de HPV, considerando que existem mais de 150 cepas conhecidas.

O risco de desenvolver câncer associado ao HPV varia dependendo do tipo de cepa e localização. O HPV é responsável por 99,9% dos casos de câncer cervical, podendo também causar câncer de ânus e cavidade orofaríngea. No entanto, as estirpes de alto risco oncológico são menos frequentes que as estirpes de baixo risco, destacando-se principalmente os tipos 16 e 18.

Dadas estas circunstâncias, destaca-se a importância da promoção da educação sexual entre os jovens, bem como da utilização de métodos preventivos como preservativos, barreiras orais de látex e vacinas. Recomenda-se também fortalecer o sistema imunológico e proteger as células das mucosas e da pele para combater infecções, seguindo sempre as instruções terapêuticas do médico correspondente.

O resultado de um dos estudos clínicos realizados com Após tomar AHCC® por 6 meses, cerca de 60% dos pacientes infectados com HPV de alto risco apresentaram resolução da infecção. A suplementação de AHCC® também aumentou a contagem de células T, indicando que o AHCC® pode eliminar o HPV modulando a imunidade.

Papiloxyl está registado na Agência Espanhola de Consumo, Segurança Alimentar e Nutrição (AECOSAN) em conformidade com a regulamentação em vigor.

Artigo ENSAIO CLÍNICO
Frente. Oncol., 22 de junho de 2022
Seção. Oncologia Ginecológica
Volume 12 - 2022 | https://doi.org/10.3389/fonc.2022.881902
Suplementação de AHCC® para apoiar a função imunológica para eliminar infecções persistentes por papilomavírus humano.

Objetivo : Determinar a eficácia, segurança e durabilidade do uso da suplementação de AHCC por 6 meses para apoiar o sistema imunológico do hospedeiro na eliminação de infecções de alto risco pelo papilomavírus humano (HPV). O suplemento AHCC é um extrato patenteado e padronizado de micélio de lentínula edodes cultivado (AHCC®, Amino Up, Ltd., Sapporo, Japão) que demonstrou ter benefícios moduladores imunológicos exclusivos.

Desenho do estudo : Este foi um estudo randomizado, duplo-cego e controlado por placebo (CTN: NCT02405533) em 50 mulheres com mais de 30 anos de idade com infecções persistentes por HPV de alto risco confirmadas por mais de 2 anos. Os pacientes foram randomizados para receber placebo uma vez ao dia durante 12 meses (N = 25) ou suplementação de 3 g de AHCC por via oral uma vez ao dia com o estômago vazio durante 6 meses, seguidos de 6 meses de placebo (N = 25). A cada 3 meses, os pacientes foram avaliados com testes de DNA do HPV e RNA do HPV, bem como uma amostra de sangue coletada para avaliar um painel de marcadores imunológicos, incluindo interferon-alfa, interferon-beta (IFN-?), interferon-gama (IFN-?) , IgG1, linfócitos T e níveis de células natural killer (NK). Ao final do período de estudo de 12 meses, os pacientes no braço do placebo tiveram a opção de continuar no estudo para receber suplementação de AHCC sem ocultação por 6 meses, com as mesmas consultas de acompanhamento e testes do braço de intervenção.

Resultados : Cinquenta mulheres com HPV de alto risco foram inscritas e 41 completaram o estudo. Quatorze (63,6%) dos 22 pacientes no braço de suplementação de AHCC foram negativos para RNA de HPV/DNA de HPV após 6 meses, com 64,3% (9/14) alcançando uma resposta duradoura definida como sendo negativa para RNA de HPV/DNA de HPV após 6 meses sem suplementação . No braço placebo, dois (10,5%) dos 19 pacientes foram negativos para HPV aos 12 meses. Nos doze pacientes do grupo placebo que foram eleitos para continuar no estudo não cego, 50% (n = 6) eram negativos para RNA do HPV/DNA do HPV após 6 meses de suplementação com AHCC. No momento da conclusão do estudo, havia um total de 34 pacientes (22 cegos e 12 não cegos) que haviam recebido suplementação de AHCC com uma taxa de resposta global de 58,8% que eliminou infecções persistentes por HPV. No momento da inclusão, o nível médio de IFN-? era de 60,5 ± 37,6 pg/ml em mulheres com infecções persistentes por HPV confirmadas. A supressão de IFN-? para menos de 20 pg/ml correlacionou-se com um aumento de linfócitos T e IFN-? e eliminação duradoura de infecções por HPV em mulheres que receberam suplementação de AHCC.

Conclusão : Os resultados deste estudo de fase II demonstraram que 3 g de AHCC uma vez ao dia foi eficaz para apoiar o sistema imunológico do hospedeiro na eliminação de infecções persistentes por HPV e foi bem tolerado, sem relatos de efeitos colaterais adversos significativos. A duração da suplementação de AHCC necessária além do primeiro resultado negativo precisa de mais avaliação para otimizar o sucesso e obter resultados duradouros. A supressão do nível de IFN-? para menos de 20 pg/ml correlacionou-se com a eliminação de infecções por HPV e merece avaliação adicional como ferramenta clínica para monitorização de pacientes com infecções por HPV.

Registro de ensaio clínico : clinictrials.gov/ct2/, identificador NCT02405533

Introdução
O papilomavírus humano (HPV) é classificado como um vírus de DNA de fita dupla, não envelopado, que geralmente infecta a camada epitelial das células, incluindo superfícies cutâneas e mucosas, e está associado a verrugas benignas, carcinoma in situ e lesões malignas (1, 2 ). Existem mais de 100 cepas de HPV identificadas em humanos, 40 cepas de HPV de baixo risco (LR-HPV) associadas a verrugas/lesões genitais e quinze cepas de HPV de alto risco (HR-HPV) associadas ao câncer. Quando as infecções por HR-HPV persistem ao longo do tempo, os pacientes apresentam um risco aumentado de desenvolver câncer (3). Contudo, deve notar-se que ter uma infecção persistente por HPV de alto risco não causa cancro por si só; pelo contrário, é um co-factor que contribui para o risco de desenvolvimento de cancro quando ocorre em combinação com outras agressões, como má nutrição, tabagismo, stress fisiológico ou disfunção/supressão imunitária. Nos Estados Unidos, estima-se que existam 85.890 casos de cancro causados por infecções persistentes de alto risco por HPV, e estima-se que 79 milhões de americanos estejam actualmente infectados com HPV (4, 5).

Embora a vacinação contra o HPV seja eficaz na prevenção de infecções por HPV, traz poucos benefícios para o tratamento de pacientes já infectados com HPV (6). Existem muito poucas opções de tratamento eficazes para erradicar infecções por HPV de alto risco. O objetivo das modalidades de tratamento atuais depende da detecção precoce com exame de Papanicolaou de rotina e, em seguida, tratamento pelo médico empregando crioterapia, excisão cirúrgica, procedimento de excisão eletrocirúrgica de alça (CAF) ou conização com bisturi frio. Esses procedimentos têm uma taxa de resposta maior, de 80% a 100%. Este tratamento local remove a lesão, mas os pacientes frequentemente apresentam lesões recorrentes. Outras modalidades de tratamento utilizadas para o tratamento do LR-HPV incluem a aplicação tópica de podofilotoxina com taxa de até 40% de lesões recorrentes ou imiquimode com recorrência aproximada de 15% (7, 8). Até o momento, não existe tratamento sistêmico eficaz para infecções persistentes por HPV de alto risco.

AHCC é um extrato patenteado e padronizado de micélio de lentínula edodes cultivado (AHCC®, Amino Up, Ltd., Sapporo, Japão) que foi desenvolvido no Japão em 1992; o composto é composto principalmente de componentes de ?-glucano. Vários estudos em animais e humanos relataram uma variedade de efeitos terapêuticos, incluindo atividades antioxidantes e anticancerígenas e modulação do sistema imunológico para prevenir os processos infecciosos de infecções virais e bacterianas (9?14). Em estudos clínicos, o AHCC demonstrou o benefício na redução do risco de infecção e na melhoria dos sintomas de infecções existentes (11).

Dois estudos piloto foram recentemente conduzidos em mulheres que documentaram positividade persistente para HPV por mais de 2 anos, eram saudáveis e preenchiam os demais critérios de elegibilidade (15). Dez mulheres foram inscritas no primeiro estudo para avaliar a eficácia da suplementação de 3 g de AHCC por via oral uma vez ao dia para apoiar o sistema imunológico do hospedeiro na eliminação de infecções persistentes por HPV de alto risco. O regime foi repetido mensalmente até o paciente apresentar resultado negativo para HPV ou até decorridos 6 meses de tratamento ativo. Os pacientes com resultado positivo após 6 meses de tratamento foram considerados falha do tratamento. Os testes de HPV e a triagem do painel de marcadores imunológicos foram realizados uma vez por mês para monitorar a eliminação de infecções persistentes por HPV de alto risco. Houve uma resposta encorajadora em 4 de 8 (50%) pacientes com erradicação confirmada do DNA do HR-HPV após pelo menos 3 meses e até 6 meses de suplementação diária de 3 g de AHCC (15). No segundo estudo piloto com suplementação de 1 g de AHCC uma vez ao dia, uma resposta semelhante foi observada em 4 de 9 (44%) pacientes com eliminação confirmada de infecções persistentes por HPV de alto risco após 7 meses de suplementação (15). Estes resultados de dois estudos piloto confirmam as descobertas pré-clínicas anteriores de que a suplementação de AHCC tem o potencial de ser eficaz para apoiar o sistema imunitário do hospedeiro na eliminação de infecções persistentes por HPV de alto risco e apoiaram a lógica para continuar com uma avaliação formal de fase II para confirmar estas conclusões preliminares (16).

Materiais e métodos
Design de estudo
Este foi um estudo de fase II randomizado, duplo-cego, controlado por placebo com AHCC não cego pós-estudo (Figura 1) que foi revisado e aprovado pelo Conselho de Revisão Institucional do Centro de Ciências da Saúde da Universidade do Texas HSC-MS14-0866/NCT02405533. O estudo foi realizado em mulheres com mais de 30 anos de idade com infecções persistentes por HPV de alto risco documentadas por mais de 2 anos ou mais, com valores laboratoriais todos dentro dos limites normais, com histologia normal até neoplasia intraepitelial cervical 2 (NIC2) conforme documentado pelos registros do ginecologista primário e considerado saudável. As informações demográficas dos pacientes foram coletadas, incluindo o número de parceiros sexuais ao longo da vida, métodos contraceptivos e testes periódicos de gravidez ao longo do estudo. O AHCC e o placebo correspondente foram generosamente fornecidos pela Amino Up, Ltd. (Sapporo, Japão).

figura 1
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FIGURA 1 Desenho do estudo para inscrição de pacientes. Este esquema explica como os pacientes foram randomizados e a extensão do acompanhamento com base na resposta ao papilomavírus humano (HPV) em 12 meses.

Depois que a elegibilidade foi confirmada com base nos critérios da Tabela 1, os pacientes forneceram consentimento informado assinado e foram randomizados de forma justa por meio de plataforma de computador entre os dois grupos de estudo, de modo que após a inscrição de 30 pacientes, houvesse 15 pacientes em cada braço, e na conclusão do inscrição no estudo, havia 25 pacientes em cada braço. O Grupo 1 serviu como braço de intervenção e recebeu suplementação de AHCC de 3 g por via oral com o estômago vazio, uma vez ao dia, durante 6 meses, seguido de 6 meses de placebo por via oral com o estômago vazio. O objetivo dos 6 meses de placebo no grupo 1 foi ajudar a facilitar a manutenção do cegamento durante o período de estudo de 12 meses. O Grupo 2 serviu como braço de controle e recebeu placebo por via oral com o estômago vazio durante 12 meses.

Os pacientes foram monitorados uma vez a cada 3 meses durante o estudo com uma visita clínica para revisar o diário da pílula para avaliar a adesão, avaliar qualquer toxicidade experimentada nos 90 dias anteriores e coletar amostras de HPV por meio de esfregaço/escova cervical e amostra de sangue periférico. O estudo foi revelado aos 12 meses para determinar o status do HPV e os resultados dos marcadores imunológicos e revelar as atribuições dos braços do estudo. Todos os pacientes que receberam AHCC e foram negativos para HPV aos 12 meses foram monitorados por mais 6 meses (para um total de 12 meses de monitoramento após a conclusão da suplementação de AHCC). Aos 12 meses, se os pacientes do braço de controle ainda fossem HPV positivos com placebo, então os pacientes foram convidados a continuar com o AHCC sem ocultação para obter mais informações sobre sua toxicidade e eficácia. O objetivo do ?crossover? após a revelação do momento foi também ajudar a melhorar o recrutamento e a inscrição, uma vez que o AHCC é um suplemento nutricional prontamente disponível.

O resultado primário deste estudo foi avaliar a eliminação da infecção persistente por HPV de alto risco determinada pelos resultados negativos dos testes de DNA do HPV alcançados durante o recebimento da suplementação de AHCC e mantidos por 3, 6 e 12 meses após a conclusão da suplementação de AHCC em comparação com o recebimento da suplementação de AHCC. placebo. Aos 12 meses, após receberem suplementação de AHCC durante 6 meses, se os pacientes ainda fossem positivos para o DNA do HPV, isso era considerado uma falha do tratamento ou nenhuma resposta (NR), e eles saíam do estudo. Se negativo após a conclusão de 6 meses de suplementação de AHCC e 6 meses de placebo, os pacientes continuaram o estudo por mais 6 meses (duas visitas) para confirmar que permaneciam negativos para HPV e para avaliar a durabilidade da resposta. Uma resposta completa (CR) foi definida como aqueles pacientes que eram negativos para RNA de HPV e DNA de HPV no momento da conclusão da suplementação de AHCC e permaneceram negativos para RNA de HPV e DNA de HPV durante os 12 meses de acompanhamento sem a suplementação de AHCC. Uma resposta parcial (RP) foi definida como aqueles pacientes que eram negativos para RNA de HPV e DNA de HPV no momento da conclusão da suplementação de AHCC, mas depois testaram RNA de HPV ou DNA de HPV positivo em uma ou mais consultas nos 12 meses de acompanhamento. sem suplementação de AHCC. O Grupo 2 serviu como controle para todos os momentos durante o estudo. Os dados de segurança e eficácia foram coletados nos pacientes que optaram por continuar com a suplementação não cega de AHCC por 6 meses.

Coleta e Processamento de Amostras
Em cada visita, uma amostra ginecológica (parede cervical ou vaginal) foi coletada por três métodos ? escova de citologia, vassoura de citologia e espátula cervical ? para garantir uma amostra adequada e transferida para um frasco de amostra ginecológica líquida ThinPrep® (Hologic, Inc., Marlborough, MA, EUA). Doze mililitros de sangue total foram coletados em tubos de EDTA (BD Biosciences, San Jose, CA, EUA) de todos os pacientes em todas as visitas. Todas as amostras de sangue foram centrifugadas a 1.500 rpm por 10 min, e as amostras de plasma foram separadas e armazenadas a -80°C dentro de 6 horas após a coleta até uso posterior. As células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) foram isoladas do sangue restante por centrifugação em gradiente de densidade sobre Meio de Separação de Linfócitos Ficoll (Lonza, Basileia, Suíça) utilizando o protocolo do fabricante. As PBMCs foram criopreservadas em meio de congelamento contendo 90% de soro fetal bovino (FBS) e 10% de dimetilsulfóxido (DMSO) em nitrogênio líquido (-196 ° C) até uso posterior. O FBS foi adquirido da GIBCO Invitrogen Co. (Carlsbad, CA, EUA). O DMSO foi adquirido da Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, EUA).

Análise de amostra de papilomavírus humano
As amostras de HPV foram inicialmente avaliadas com testes de RNA de HPV E6/E7 (APTIMA, Hologic, Marlborough, MA, EUA) no laboratório de Patologia Molecular da UTHealth McGovern Medical School. Os resultados negativos para RNA do HPV foram confirmados com o teste COBAS HPV DNA (Roche Molecular Systems, Inc., Branchburg, NJ, EUA) no laboratório de Patologia Molecular Metodista para detectar a presença de DNA do HPV e descartar infecções latentes por HPV.

Ensaios de marcadores imunológicos e células assassinas naturais
Kits ELISA sanduíche prontos para uso para a detecção de Interferon-alfa e beta humano foram adquiridos da R&D Systems (Minneapolis, MN, EUA). Os kits de interferon-gama humano (IFN-?) e IgG1 ELISA foram adquiridos da Affymetrix eBioscience (San Diego, CA, EUA). ELISAs sanduíche para detecção de IgG1 total, interferon-alfa, interferon-beta e interferon-gama foram realizados de acordo com o protocolo do fabricante. Para cada série de determinações de marcadores imunológicos, foi construída uma curva padrão com concentrações conhecidas desses marcadores fornecidas com os kits. As concentrações plasmáticas destes marcadores imunológicos em cada momento foram calculadas a partir de gráficos padrão e foram comparadas com as concentrações basais.

Foram utilizados cinco anticorpos anti-humanos de ratinho para a identificação e quantificação de células assassinas naturais humanas (células NK): clone CD56 APC, B159; Clone CD3 PerCP-Cy5.5, UCHT1; clone CD2 PE, RPA 2.10; clone CD7 FITC, M-T701; e clone CD45 APC-H7, 2D1. Todos os anticorpos e soluções de lise de triagem celular ativada por fluorescência (FACS) foram adquiridos da BD Biosciences (San Jose, CA, EUA). Para análise de citometria de fluxo de células NK humanas, as PBMCs criopreservadas em cada momento foram suavemente descongeladas e centrifugadas com 5 ml de meio completo a 1.500 rpm durante 5 min a 4°C. Os sedimentos celulares foram ressuspensos em 100 µl de tampão FACS (solução salina tamponada com fosfato (PBS) com 5% de FBS). Para coloração das células, um conjunto de células de cada amostra foi incubado com 5 µl de CD45 APC, e o segundo conjunto de células foi incubado com 50 µl de um coquetel de cinco anticorpos por 15 min no escuro à temperatura ambiente conforme protocolo do fabricante. Após a incubação, 1 ml de tampão de lise FACS foi adicionado a todos os tubos e foi incubado durante 5 min no escuro à temperatura ambiente. Para interromper a síntese das células, foi adicionado 1 ml de PBS a cada tubo imediatamente após a incubação. Todos os tubos foram então centrifugados a 1.500 rpm durante 5 min e as células foram ressuspensas em 500 µl de tampão FACS e armazenadas a 4°C.

As células coradas foram adquiridas utilizando LSR II (BD Biosciences) e o software Diva foi utilizado para análise. Com o uso de dispersão direta e lateral, a população de linfócitos foi controlada na dispersão lateral baixa e na população CD45 brilhante enquanto adquiria os 50.000 eventos bloqueados. A população de células NK foi então identificada como células (CD3 negativas, CD 2, CD56C e CD7 positivas). A porcentagem de células T e células NK da porta de linfócitos foi obtida para a análise final.

Análise Estatística
Nesta população, mulheres com infecções persistentes por HPV, a erradicação ou eliminação esperada da infecção por HPV por si só é de zero a 10%. A taxa de sucesso alvo com base nos dados do estudo piloto foi de 50% 6 meses após o final da suplementação de AHCC e 12 meses após o final da suplementação. Com base nestas proporções, 10% de depuração na ausência de suplementação e 50% de depuração com suplementação, foi realizada uma análise de potência utilizando simulação de dados no Mplus 7.2 através de um processo de múltiplas etapas (17). Esperava-se que a diferença proporcional fosse observada entre o grupo 1 de intervenção com suplementação de AHCC e o grupo 2 de controle com placebo no final dos 6 meses pós-tratamento. Com um nível de confiança de 0,05, uma amostra de no máximo 50 pacientes (N = 25 por grupo) tem 94,5% de poder para alcançar a detecção do efeito da intervenção do estudo. As características basais dos pacientes por grupo de estudo foram comparadas utilizando o teste do qui-quadrado para variáveis categóricas e o teste de Student para variáveis contínuas. O teste de Mann-Whitney foi utilizado para avaliar as diferenças nas taxas de resposta com base na durabilidade da resposta do HPV (NR, PR e CR) entre os braços do estudo que responderam versus os que não responderam. A análise do teste t de Student foi utilizada para avaliar as diferenças entre os marcadores imunológicos entre a suplementação de AHCC e as intervenções com placebo. Todas as análises foram realizadas com o software SPSS (versão 24) (IBM, Nova York, NY, EUA). Todos os valores de p foram bilaterais, com valores de p inferiores a 0,05 considerados significativos.

Resultados
Cinquenta mulheres com HR-HPV foram incluídas neste estudo e 41 completaram o estudo (Figura 2). Todos os pacientes tinham infecção por HPV de alto risco confirmada há mais de 2 anos e foram confirmados novamente no momento da inscrição. Os pacientes no braço placebo e suplementação com AHCC foram semelhantes em idade, raça/etnia, índice de massa corporal (IMC), número de parceiros sexuais anteriores e número de parceiros atuais durante o estudo. As informações demográficas dos pacientes estão resumidas na Tabela 2. Quatorze (63,6%) dos 22 pacientes no braço de suplementação de AHCC foram negativos para RNA de HPV/DNA de HPV após 6 meses. Nove dos 14 (64,3%) pacientes ainda eram negativos para HPV com ambos os métodos de ensaio de RNA de HPV e DNA de HPV 12 meses após a interrupção da suplementação de AHCC. Dois dos 14 (14,3%) pacientes foram positivos para HPV com ambos os métodos de ensaio de RNA de HPV e DNA de HPV após interrupção do AHCC aos 12 meses. Oito dos 22 (36,3%) pacientes no braço AHCC foram positivos para HPV com métodos de ensaio de RNA de HPV e DNA de HPV após 6 meses de suplementação de AHCC. No braço placebo, dois (10,5%) dos 19 pacientes foram negativos para HPV aos 12 meses. Dezessete (89,5%) pacientes permaneceram positivos para HPV ao final de 12 meses. Doze pacientes completaram o estudo não cego e 50% (n = 6) foram negativos para RNA de HPV/DNA de HPV após 6 meses de suplementação de AHCC. A combinação de todos os 34 pacientes que receberam suplementação de AHCC dá uma taxa de resposta global de 58,8% que eliminou infecções persistentes por HPV. Estes resultados estão resumidos na Tabela 3. Todos os pacientes foram incluídos na análise de segurança para comparar o perfil de toxicidade da suplementação de AHCC com o placebo. Nenhum paciente relatou grau superior a 1 (Critérios de Terminologia Comum para Eventos Adversos (CTCAE) V5.0, 2018) com placebo ou suplementação de AHCC, e os eventos adversos foram resolvidos no primeiro mês do estudo. Nenhum paciente interrompeu o estudo devido a eventos adversos. O perfil de toxicidade da suplementação de AHCC foi comparável ao do placebo (Tabela 4).

ELISAs e análises de fluxo de linfócitos totais e células NK realizadas em amostras de plasma em diferentes momentos de 41 pacientes que completaram o estudo mostraram que a supressão de IFN-? para menos de 20 pg/ml se correlacionou com um aumento de linfócitos T e IFN-? e eliminação de infecções por HPV em mulheres que receberam suplementação de AHCC. A alteração percentual média nos linfócitos T desde o início foi entre 25% e 45% nos entrevistados completos, o que foi estatisticamente significativo. Houve um aumento médio de 45% nos linfócitos T em um período de 6 meses em pacientes com resposta completa e parcial, enquanto os pacientes que não responderam e que receberam placebo não mostraram uma alteração significativa nos linfócitos T. A alteração percentual média nas células NK foi inferior a 10% da linha de base e não foi estatisticamente significativa em todos os grupos.

Discussão
Este foi o primeiro estudo clínico duplo-cego, controlado por placebo, a demonstrar que o suplemento nutricional, AHCC, é eficaz na eliminação de infecções persistentes e de alto risco por HPV, com resposta duradoura nos pacientes que atingiram um nível de IFN-? abaixo de 20 pg/ ml. No geral, o AHCC foi bem tolerado e teve efeitos adversos comparáveis aos do placebo.

Atualmente, existem opções eficazes limitadas para eliminar infecções persistentes por HPV-HR e a maioria envolve procedimentos invasivos ou tratamentos tópicos locais que não impedem necessariamente que o vírus HPV retorne a esse local ou a outras áreas potencialmente infectadas do corpo, como o ânus ou epitélio infectado de cabeça e pescoço. Felizmente, a maioria dos pacientes com sistema imunológico saudável eliminará por conta própria infecções por HPV de alto risco dentro de 6 a 18 meses, sem quaisquer intervenções (16, 18). Apenas aproximadamente 10% dos pacientes geralmente sofrem de infecções persistentes por HPV (16, 18). Não existem outras intervenções sistémicas que tenham comprovadamente uma resposta duradoura para eliminar infecções persistentes por HPV.

AHCC é um extrato patenteado e padronizado de micélio de lentínula edodes cultivado (AHCC®, Amino Up, Ltd., Sapporo, Japão); o composto é composto principalmente de componentes de ?-glucano em comparação com a maioria dos extratos de cogumelos, que são compostos de componentes de ?-glucano. O AHCC exibe modulação imunológica única para regular negativamente o nível de IFN-? hiperestimulado, resultando em feedback negativo para iniciar a liberação de IFN-? e linfócitos T necessários para eliminar infecções virais crônicas (17). Esta redefinição da imunidade do hospedeiro foi demonstrada em dois estudos independentes realizados por Wilson e colegas e Teijaro e colegas, que avaliaram infecções persistentes pelo vírus da coriomeningite linfocítica (LCMV) e demonstraram que a supressão da sinalização crônica do IFN-? pode redefinir a imunidade do hospedeiro e permitir o controle e eliminação de infecções virais persistentes (19, 20). Em geral, os extratos de cogumelos ?-glucanos são imunoestimulantes da via do IFN-?, que são úteis no apoio ao sistema imunológico em infecções agudas, mas não tanto em infecções virais crônicas. Anteriormente, Gao e colegas demonstraram os efeitos imunomoduladores do AHCC num estudo que mostrou uma activação aumentada do antigénio (Ag) das células T CD4 (+) e CD8 (+), bem como um aumento nas células NK (10). Além disso, Roopngam e colegas demonstraram que os ?-glucanos de polissacarídeos do cogumelo ostra cinzento (Pleurotus sajor-caju) têm uma potente actividade imunomoduladora (21). A imunomodulação de um polissacarídeo de cogumelo aumenta a expansão das células T CD+/CD8+ (21). Os dados deste estudo clínico também mostraram um aumento significativo de linfócitos T em pacientes que estavam no braço de suplementação de AHCC.

O sistema imunitário humano começa a enfraquecer por volta dos 25 anos de idade, o que talvez possa ser o factor que contribui para que as infecções persistentes por HPV sejam mais frequentemente observadas em mulheres com mais de 30 anos ou com outras condições imunossupressoras.

Este estudo de fase II confirmou os resultados dos dois estudos piloto anteriores que demonstraram que a suplementação de AHCC irá modular o sistema imunitário do hospedeiro para eliminar infecções persistentes por HPV de alto risco (14). Embora possa não ajudar todos os pacientes, na ausência de outros tratamentos sistêmicos, os médicos podem recomendar o AHCC, que é um suplemento nutricional prontamente disponível que oferece uma boa chance de eliminação de infecções persistentes por HPV.

Anteriormente, os dois estudos piloto que avaliaram a suplementação de AHCC em mulheres com infecções persistentes por HR-HPV identificaram que níveis de IFN-? inferiores a 20 pg/ml se correlacionavam com a eliminação de HR-HPV (17). Este estudo de fase II confirmou a correlação entre níveis suprimidos de IFN-? para menos de 20 pg/ml com um aumento de linfócitos T e IFN-?, o que resultou na eliminação de infecções por HPV em mulheres que receberam suplementação de AHCC. Naqueles pacientes que eram negativos para RNA de HPV/DNA de HPV após 6 meses de suplementação de AHCC, mas tinham um nível médio de IFN-? superior a 20 pg/ml, dois permaneceram negativos para RNA de HPV, mas positivos para DNA de HPV, e três eram ambos RNA de HPV e HPV. DNA positivo 3 meses depois da interrupção da suplementação. Isto identificou a oportunidade para pesquisas futuras otimizarem e personalizarem a duração da suplementação tanto no status de infecção por HPV quanto no nível alvo de IFN-?. Além disso, os dados deste estudo identificaram a oportunidade potencial de empregar o monitoramento dos níveis de IFN-?, que poderia ser usado tanto para homens quanto para mulheres com infecções por HPV. Embora este estudo tenha se concentrado em mulheres com infecções por HR-HPV, na ausência de ferramentas de teste eficazes para o status do HPV em homens e com um perfil de segurança comparável ao do placebo, o uso da suplementação de AHCC para homens com exposição conhecida ao HR-HPV (ou seja, , parceiros de mulheres com HR-HPV), bem como aquelas com infecções por LR-HPV, poderiam considerar a suplementação de AHCC para eliminar a infecção por HPV.

Este estudo de fase II foi apoiado por estudos pré-clínicos in vitro, estudos in vivo em animais e dois estudos piloto que determinaram o mecanismo de ação e confirmaram os benefícios da suplementação de AHCC para eliminar infecções persistentes por HPV. A maior força deste estudo é que, embora o AHCC não seja uma intervenção medicamentosa tradicional, os benefícios da suplementação do AHCC foram comparados ao teste de eficácia tradicional de um ensaio duplo-cego, randomizado e controlado por placebo. Ao contrário de muitos estudos de suplementos nutricionais, este estudo analisou marcadores imunológicos específicos para confirmar o mecanismo de modulação do AHCC na função imunológica do hospedeiro. Devido aos recursos de financiamento limitados, este estudo não pôde explorar todos os mecanismos possíveis de modulação imunológica que podem ter apoiado a eliminação das infecções persistentes por HPV. Como a hipótese dos benefícios do AHCC se baseia na modulação da função imunológica do hospedeiro, a tipagem específica do HPV não foi incluída neste estudo, o que precisa ser avaliado mais de perto em estudos futuros.

Em conclusão, os resultados deste estudo de fase II demonstraram que 3 g de AHCC uma vez ao dia foi eficaz para apoiar o sistema imunológico do hospedeiro na eliminação de infecções persistentes por HPV e foi bem tolerado, sem relatos de efeitos colaterais adversos significativos. A duração da suplementação de AHCC necessária além do primeiro resultado negativo necessita de mais avaliação para otimizar resultados duradouros com base no estado de infecção por HPV e no nível alvo de IFN-?.

Declaração de disponibilidade de dados
As contribuições originais apresentadas no estudo estão incluídas no artigo/materiais suplementares. Dúvidas adicionais podem ser direcionadas ao autor correspondente.

Declaração de ética
Os estudos envolvendo participantes humanos foram revisados e aprovados pelo Conselho de Revisão Institucional do Centro de Ciências da Saúde da Universidade do Texas. Os pacientes/participantes forneceram seu consentimento informado por escrito para participar deste estudo. O consentimento informado por escrito foi obtido do(s) indivíduo(s) para a publicação de quaisquer imagens ou dados potencialmente identificáveis incluídos neste artigo.

Contribuições do autor
JS atuou como investigador principal do ensaio clínico e foi responsável pela concepção do estudo, desenho do protocolo, análise de dados, interpretação clínica dos dados, redação e finalização do manuscrito. AG, LM e BR atuaram como a principal equipe de pesquisa responsável pela triagem de pacientes, visitas clínicas, coleta e análise de amostras e participaram da redação e revisão do manuscrito. JF atuou como colaborador clínico neste estudo e participou da concepção do protocolo, interpretação clínica dos dados e revisão final do manuscrito. JL atuou como colaborador clínico neste estudo e participou da interpretação clínica dos dados e revisão final do manuscrito. YB atuou como colaborador da pesquisa participando da interpretação da amostra de análise, elaboração do protocolo e revisão do manuscrito final. RO atuou como colaborador de pesquisa participando da interpretação da amostra de análise e implicações para futuros ensaios de monitoramento. Participou da revisão e finalização do manuscrito. TB atuou como colaborador clínico neste estudo e participou da concepção do protocolo, interpretação clínica dos dados e revisão final do manuscrito. Todos os autores listados deram uma contribuição substancial, direta e intelectual ao trabalho e aprovaram-no para publicação.

Financiamento
Este estudo foi apoiado pelo NIH-NCI Small Grants Program for Cancer Research (1R03CA212935), que não teve envolvimento no desenho do estudo, coleta de dados, análise de dados e interpretação ou redação do manuscrito ou sua publicação.

Conflito de interesses
JS recebeu vários subsídios de pesquisa irrestritos apoiando estudos pré-clínicos sobre AHCC antes de 2014 da Amino Up, Ltd.

Os demais autores declaram que a pesquisa foi realizada na ausência de quaisquer relações comerciais ou financeiras que pudessem ser construídas como potencial conflito de interesses.

Nota do editor
Todas as reivindicações expressas neste artigo são de responsabilidade exclusiva dos autores e não representam necessariamente as de suas organizações afiliadas, ou as do editor, dos editores e dos revisores. Qualquer produto que possa ser avaliado neste artigo, ou reclamação que possa ser feita por seu fabricante, não é garantido ou endossado pelo editor.

Agradecimentos
Os resultados finais do estudo serão apresentados oralmente no Encontro virtual da Associação Central de Obstetrícia e Ginecologia, em 7 de novembro de 2020, e recebeu o prêmio ?Dr. Prêmio George W. Morley Memorial Paper?.

Referências
1. Harris RWC, Brinton LA, Cowdell RH, Skegg DC, Smith PG, Vessey MP, et al. Características de mulheres com displasia ou carcinoma in situ do colo do útero. Ir J Câncer (1980) 42:359?69. doi:10.1038/bjc.1980.246

Resumo PubMed | Texto completo CrossRef | Google Scholar

2. Furumoto H, Irahara M. Papilomavírus Humano (HPV) e Câncer Cervical. O Jornal de Investigação Médica: JMI. (2002) 49(3-4):124?33.

Resumo PubMed | Google Scholar

3. Schiffman M, Wheeler CM, Castelo PE. O DNA do papilomavírus humano permanece detectável por mais tempo do que as anormalidades citológicas cervicais relacionadas. J Infect Dis (2002) 186:1169?72. doi9:10.1128/JCM.42.2.505-511.2004

Resumo PubMed | Texto completo CrossRef | Google Scholar

4. Sobre o HPV, Centros de Controle e Prevenção de Doenças. Disponível em: https://www.cdc.gov/hpv/parents/about-hpv.html?CDC_AA_refVal=https%3A%2F%2Fwww.cdc.gov%2Fhpv%2Fparents%2Fwhatishpv.html Acessado em 13/09/19 .

Google Scholar

5. Doenças Sexualmente Transmissíveis (DST). Centros de Controle e Prevenção de Doenças. Disponível em: https://www.cdc.gov/std/hpv/default.htm acessado em 17/09/19.

Google Scholar

6. Koutsky LA, Ault KA, Wheeler CM, Brown DR, Barr E, Alvarez FB, et al. Um ensaio controlado de uma vacina contra o papilomavírus humano tipo 16. NJMED (2002) 347(21):1645?51. doi:10.1056/NEJMoa020586

Texto completo CrossRef | Google Scholar

7. Von Krogh G, Held Berg D. Autotratamento com creme de podofilotoxina a 0,5% de condiloma genital externo acuminado em mulheres. Um estudo duplo-cego controlado por placebo. Sex TransmDis (1992) 19(3):170?4. doi:10.1097/00007435-199205000-00012

Resumo PubMed | Texto completo CrossRef | Google Scholar

8. Beutner KR, Conant MA, Friedman-Kien AE, Conant MA, Illeman M, Thisted RA, et al. Podofilox aplicado pelo paciente para tratamento de verrugas genitais. Lancet (1989) 1(8642):831?4. doi: 10.1016/S0140-6736(89)92282-4

Resumo PubMed | Texto completo CrossRef | Google Scholar

9. Uno K, Kosuna K, Sun B, Fujii H, Wakame K, Chikumaru S, et al. O composto ativo correlacionado com hexose (AHCC) melhora os parâmetros imunológicos e o status de desempenho de pacientes com tumores sólidos. Bioterapia (2000) 14:303?9. doi:10.4162/nrp.2015.9.2.129

Texto completo CrossRef | Google Scholar

10. Gao Y, Zhang D, Sun B, Fujii H, Kosuna K, Yin Z. O composto ativo correlacionado com hexose melhora a vigilância do tumor através da regulação das respostas imunológicas inatas e adaptativas. Câncer Immunol Immunother (2006) 55:1258?66. doi:10.1007/s00262-005-0111-9

Resumo PubMed | Texto completo CrossRef | Google Scholar

11. Miura T, Kitadte K, Nishioka H, Wakame K. Estudos básicos e clínicos sobre composto correlacionado com hexose ativa. In: Bagchi D, Lau FC, Ghosh DK, editores. Biotecnologia em Alimentos Funcionais e Nutracêuticos. Londres, Reino Unido: CRC Press Taylor e Francis Group (2010). pág. 51?9.

Google Scholar

12. Hirose A, Sato E, Fujii H, Suna B, Nishiokaa H, Aruom OI, et al. A influência do composto ativo correlacionado com hexose (AHCC) nos efeitos quimioterápicos e colaterais evocados pela cisplatina em camundongos portadores de tumor. Toxicol Appl Pharmacol (2007) 222:152?8. doi:10.1016/j.taap.2007.03.031

Resumo PubMed | Texto completo CrossRef | Google Scholar

13. Ishibashi H, Ikeda T, Tansho S, Ono Y, Yamazaki M, Sato A, et al. Eficácia profilática de uma preparação de basidiomicetos AHCC contra infecções oportunistas letais em camundongos. Yakugaku Zasshi (2000) 120:715?9. doi:10.1248/yakushi1947.120.8_715

Resumo PubMed | Texto completo CrossRef | Google Scholar

14. Hunter RJ, Fujii H, Wakame K, Gaikwad A, Wolf JK, Smith JA. Avaliação do composto ativo correlacionado com hexose (AHCC) em combinação com doxorrubicina lipossomal PEGuilada para tratamento de câncer de ovário. Int J Appl Res Produtos Naturais (2011) 4(3):6?11. Disponível em: http://www.doaj.org/doaj?func=openurl&issn=19406223&genre=journal

Google Scholar

15. Muthén LK, Muthén BO. (1998-2011). Guia do usuário Mplus. Sexta Edição. Los Angeles, CA: Muthén & Muthén (2014).

Google Scholar

16. Ho GYF, Bierman R, Beardsley L, Chang CJ, Burk RD. História Natural da Infecção por Papilomavírus Cervicovaginal em Mulheres Jovens. N Engl J Med (1998) 338(7):423?8. doi: 10.1056/NEJM199802123380703

Resumo PubMed | Texto completo CrossRef | Google Scholar

17. Smith JA, Mathew L, Gaikwad A, Rech B, Burney MN, Faro JP, et al. Da bancada à beira do leito: avaliação da suplementação de AHCC para modular a imunidade do hospedeiro para eliminar infecções de alto risco por papilomavírus humano. Frente Oncol (2019) 9:173. doi:10.3389/fonc.2019.00173

Resumo PubMed | Texto completo CrossRef | Google Scholar

18. Doorbar J. Controle do hospedeiro da infecção e doença pelo vírus do papiloma humano. Best Prac Res Clin Obstet Gynecol (2018) 47:27?41. doi:10.1016/j.bpobgyn.2017.08.001

Texto completo CrossRef | Google Scholar

19. Wilson EB, Yamada DH, Elsaesser H, Herskovitz J, Deng J, Cheng G, et al. Bloqueio da sinalização crônica de interferon tipo I para controlar infecção persistente por LCMV. Ciência (2013) 340:202?7. doi:10.1126/science.1235208

Resumo PubMed | Texto completo CrossRef | Google Scholar

20. Teijaro JR, Ng C, Lee AM, Sullivan BM, Sheehan KCF, Welch M, et al. A infecção persistente por LCMC é controlada pelo bloqueio da sinalização de interferon tipo I. Ciência (2013) 340:207?11. doi:10.1126/science.1235214

Resumo PubMed | Texto completo CrossRef | Google Scholar

21. Roopngam PE, Sralongrua T, HuayKra A. Aumento da resposta de linfócitos T humanos por células dendríticas pulsadas com HPV16E7 e Pleurotus Sajor-Caju-?-Glucan (PBG). Irã J Immunol (2018) 15(4):246?55. doi: 10.22034/IJI.2018.39394

Resumo PubMed | Texto completo CrossRef | Google Scholar